隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，基因檢測的需求也不斷增加，實(shí)驗(yàn)室面臨的壓力越來越大，他們需要不斷提高基因檢測的診斷和管理能力，面臨著巨大的挑戰(zhàn)，基因檢測領(lǐng)域也為了最大程度地減少污染應(yīng)建立良好操作規(guī)范，確保遵守良好操作規(guī)范是至關(guān)重要的。

1、實(shí)驗(yàn)人員

實(shí)驗(yàn)室工作人員在上崗前，應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核，確保操作正確、熟練。應(yīng)熟練掌握各項(xiàng)操作步驟，盡量在短時間內(nèi)完成各項(xiàng)操作。借助實(shí)驗(yàn)室信息化管理系統(tǒng)LIMS，可以進(jìn)行人員規(guī)范化地管理，主要功能包括人員資料、檔案、合同等信息維護(hù)以及人員培訓(xùn)、考核信息管理、工作量統(tǒng)計等功能；

2、實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域要有明顯標(biāo)識，并使用單向流動降低潛在污染。

用顏色標(biāo)簽對每個實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、試劑、工作服和供應(yīng)品有助于保持單向流動。實(shí)驗(yàn)室手冊和筆記本也不能在每個房間之間進(jìn)行傳遞。實(shí)驗(yàn)室可以用實(shí)驗(yàn)室信息化管理系統(tǒng)LIMS電子數(shù)據(jù)報告以避免這種潛在污染的來源。

3、在一天的工作中，實(shí)驗(yàn)員在擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測室工作之后不能再返回試劑或樣品提取區(qū)。類似地，實(shí)驗(yàn)員在樣品提取區(qū)工作后不能返回試劑準(zhǔn)備區(qū)如果一個實(shí)驗(yàn)員不能不返回工作流向中上游的房間，實(shí)驗(yàn)員應(yīng)該先淋浴和更換衣服。

若在一些極端情況下，一些耗材和試劑不能不返回工作流向中上游的房間，必須事先使用漂白劑和酒精對其進(jìn)行徹底清潔。返還的物品架在浸泡于蒸餾水中轉(zhuǎn)移到潔凈區(qū)之前，應(yīng)浸泡在1％漂白劑溶液中過夜，如果破壞了工作流向，受影響的實(shí)驗(yàn)室房間和設(shè)備需要進(jìn)行檢測結(jié)果的監(jiān)測。

實(shí)驗(yàn)室信息化管理系統(tǒng)LIMS可以做到與實(shí)驗(yàn)室各種電子設(shè)備，如監(jiān)控系統(tǒng)、門禁控制系統(tǒng)等智能相連，有利于基因檢測實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化控制，提升實(shí)驗(yàn)室整體質(zhì)量控制。

4、每間實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)該配備專用實(shí)驗(yàn)室外套和無粉手套。實(shí)驗(yàn)者在任何時候都要穿工作服和佩戴手套。手套要經(jīng)常更換，在DNA提取過程中每一步之間都要更換。離開實(shí)驗(yàn)室之前要脫掉實(shí)驗(yàn)服，扔掉手套。更換實(shí)驗(yàn)服和手套降低了模板(PCR進(jìn)行需要的核酸)或擴(kuò)增核酸的污染可能性。在處理了陽性對照樣品或含目標(biāo)序列的樣品后、處理了模板或擴(kuò)增核酸后，與外界皮膚接觸后，要更換手套。后者防止引入在皮膚上存在的酶，如降解核酸的DNA酶和RNA酶。

5、定期清洗防護(hù)服可降低對工作區(qū)和PCR反應(yīng)的污染風(fēng)險。實(shí)驗(yàn)服要和普通衣服隔離開(如實(shí)驗(yàn)服不能帶回家，不能和其它衣服一起洗)。清洗時，一個工作區(qū)域的工作服放在一起洗(如樣品核酸提取區(qū)的防護(hù)服不能和擴(kuò)增及產(chǎn)品檢測室的防護(hù)服一起洗)。負(fù)責(zé)清洗防護(hù)服的公司要確保分批清洗防護(hù)服，防止一個實(shí)驗(yàn)區(qū)域的防護(hù)服和另一個區(qū)域的防護(hù)服混雜在一起清洗。清洗的時間取決于實(shí)驗(yàn)室PCR工作的工作量，工作量大的實(shí)驗(yàn)室可能每周或每天清洗防護(hù)服。制作陽性對照時穿著的防護(hù)服要指定只用于這項(xiàng)工作時穿著，而且清洗得要更勤。為了減少清洗，也可以使用一次性防護(hù)服。

6、每次實(shí)驗(yàn)后，所有表面都要用0.6％的次氯酸鈉進(jìn)行清理。次氯酸鈉應(yīng)該當(dāng)天配制，將商業(yè)漂白劑與水進(jìn)行1:10的稀釋，將pH調(diào)到7。這個溶液可以抑制致病原，破壞核酸。殘留的漂白劑要用0.1％的硫代硫酸鈉和70％乙醇或等價物去除，否則可能會在不銹鋼或罩子上留下斑跡。商業(yè)產(chǎn)品是為去除核酸特別設(shè)計的，核酸酶也可以用于表面的清理。只要懷疑受到污染，熱循環(huán)機(jī)和離心機(jī)用稀釋的漂白劑清理(同3)。離心管的清洗根據(jù)制造商的說明。貨架和托盤每次使用后在0.6％ 的次氯酸鈉溶液中浸泡后用水充分沖洗。凝膠梳和玻璃器皿使用后用中性洗滌劑或用水沖洗。UNG酶進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，可以去除殘留在DNA中的dU(但不影響DNA、gUTP或RNA)，產(chǎn)生數(shù)十或數(shù)百的無堿基位點(diǎn)，DNA聚合酶會在這些位點(diǎn)處停滯。而且這些位點(diǎn)是不穩(wěn)定的，在熱循環(huán)中會發(fā)生斷裂，每一種損傷都會防止重擴(kuò)增的發(fā)生。PCR產(chǎn)物越長，UNG去污染的效率就越高，但對短于100bp的PCR產(chǎn)物不能用UNG完全消除污染。

7、紫外線控制污染。用紫外線使干燥的DNA失活以減少器材表面模板DNA污染的手段，機(jī)理是通過在相鄰的嘧啶堿基之間形成環(huán)丁烷而造成DNA損傷，環(huán)丁烷形成鏈內(nèi)的嘧啶二聚體，從而抑制了聚合酶介導(dǎo)的鏈延伸反應(yīng)。其缺陷是不能消除所有污染，而只能將污染降低幾個數(shù)量級，并且當(dāng)DNA片段小于300bp時效果較差。另外像加樣器、離心機(jī)等器材只有一小部分是向著光源的，這樣就不能被紫外線有效地去除污染。因而，紫外線照射僅可以為PCR實(shí)驗(yàn)室的無污染提供部分安全保障。

8、應(yīng)該在日常樣品檢測中分析陽性和陰性質(zhì)量控制對照結(jié)果．以說明基于PCR方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

LIMS實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)以基礎(chǔ)檢測過程為主線，實(shí)驗(yàn)任務(wù)登記與評審、采樣、樣品登記與分配、數(shù)據(jù)輸入、數(shù)據(jù)審核、報告編制與簽發(fā)等全過程智能化管理?？赏ㄟ^與條碼儀等技術(shù)的集成，可實(shí)現(xiàn)自動定位、基礎(chǔ)信息識別批量條碼掃描等應(yīng)用；可實(shí)現(xiàn)樣本檢測過程的檢測試劑、檢測人員、檢測儀器等信息的記錄；檢測過程的全信息化管理即方便樣本的信息統(tǒng)計也便于QA 的管控，同時可快速調(diào)取大量數(shù)據(jù)為科研分析之用。